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0574-87157013
mingzhoubio@163.com
浙江省寧波市鎮海區莊市街道興莊路9號
創e慧谷42號樓B幢401室

產品名稱	UMNSAH/DF-1
商品貨號	MZ-0307
中文名稱	雞胚成纖維細胞
規格	T25
組織來源	胚胎；成纖維細胞；自發永生
形態特征	成纖維母細胞樣
生長特性	貼壁生長
細胞污染	HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。
特征特性	UMNSAH/DF-1是起源于10日齡的ELL-0雞蛋的雞細胞株，自發永生化。分離原代雞胚成纖維細胞并在培養液中培養；傳代直到衰老；在衰老過程中離心以保持細胞培養在30%到60%滿；不衰老的克隆進行鑒定并傳代不少于30次。在軟瓊脂上沒有觀察到克隆增殖，說明這些細胞是永生化而沒有轉化。這株細胞可作為病毒增殖、重組蛋白表達和重組病毒生產的基質。
培養條件	DMEM(高糖）+10%FBS（gibco）；39℃培養
傳代方法	1：2傳代
凍存條件	無血清細胞凍存液
細胞傳代步驟	如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
細胞復蘇步驟	將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
細胞凍存步驟	待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

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