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浙江省寧波市鎮海區莊市街道興莊路9號
創e慧谷42號樓B幢401室

產品名稱	兔眼角膜內皮細胞
商品貨號	MZ-4037
組織來源	角膜組織；兔
規格	5×105cells/T25培養瓶
生長特性	貼壁
細胞形態	內皮細胞樣
細胞污染	HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。
細胞描述	內皮細胞（EC）位于血漿與血管組織之間，它不僅能完成血漿和組織液的代謝交換，并且能合成和分泌多種生物活性物質，以保證血管正常的收縮和舒張，起到維持血管張力，調節血壓以及凝血與抗凝平衡等特殊功能，進而保持血液的正常流動和血管的長期通暢。抗凝血材料表面內皮細胞化，可以減少血栓的形成和血小板激活。完整內皮細胞化是最好的抗凝血，表面血管內皮組織是天然的抗凝血組織。內皮細胞膜上有天然的抗凝血成分，比如肝素，前列腺素（PGI），一氧化氮等，內皮細胞能夠合成和分泌多種內皮衍生舒張因子。
細胞傳代步驟	如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
細胞復蘇步驟	將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
細胞凍存步驟	待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

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